用来扫描液相荧光标记物发出的荧光光谱的仪器统称为荧光分光光度计。它可以提供多种物理参数,如激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等,从不同角度反映分子的键合和结构。通过对这些参数的测量,可以推断出分子在各种环境中的构象变化,当然也可以进行一般的定量分析,从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的发展经历了三个阶段:
1、手动控制荧光分光光度计
2、自动记录荧光分光光度计
3、计算机控制荧光分光光度计
荧光分光光度计按照光束多少又可分为双光束荧光分光光度计和单光束荧光分光光度计两大系列。另一些是低温激光Sh p ol‘s技术荧光分光光度计,配备寿命和相位分辨率荧光分光光度计等。
荧光分光光度计的工作原理:高压汞灯或氙灯发出的紫外和蓝紫光经滤光片照射进样品池,激发样品中的荧光物质发射荧光。经过滤波和反射后,荧光被光电倍增管接收,然后以图形或图形的形式显示出来。由于分子结构的不同,不同物质激发态能级的分布有其不同的特点。这一特性反映在荧光中。各种物质都有其特有的荧光激发和发射光谱,因此可以利用不同的荧光激发和发射光谱对物质进行定性鉴别。